原生動(dòng)物的種類與數(shù)量很多，分布極廣，生活周期短，與人類關(guān)系極其密切。反芻動(dòng)物瘤胃纖毛蟲類原生動(dòng)物占瘤胃微生物總量的50%以上并與許多瘤胃功能有關(guān)，如纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)的消化。它們還可以降解植物和霉菌毒素，維持瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，清除消化道中某些病原菌，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力從而提高肉食品的安全性[2¨。液氮罐

瘤胃纖毛蟲原生動(dòng)物在體外很難培養(yǎng)，采用傳統(tǒng)傳代保種方法不僅浪費(fèi)人力物力而且菌種容易喪失活性甚至死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差[2引。超低溫保存為對(duì)纖毛蟲進(jìn)行體內(nèi)外消化、基因組和生物

技術(shù)研究提供了方便并且可以長(zhǎng)期保持細(xì)胞活性。

早期，研究人員采用一步慢速冷凍法保存纖毛蟲成活率只有5%左右;后來人們對(duì)冷凍方法進(jìn)行改進(jìn)，形成兩步冷凍法。**步慢速冷凍至保溫溫度，使胞外水結(jié)冰;第二步保持恒溫使細(xì)胞充分脫水，然后將樣品直接投入到液氮中保存[2¨。

細(xì)胞的超低溫保存活性與冷凍液、保護(hù)劑的種類和濃度、保護(hù)劑與細(xì)胞混合時(shí)的平衡溫度和時(shí)間、冷卻速度和解凍液等多個(gè)因素有關(guān)。使用甘油或二甲基亞砜作為保護(hù)劑，以25℃替代5℃作為平衡溫度，纖毛蟲解凍后的活性增強(qiáng)[23J。Nsabimana[2們研究發(fā)現(xiàn)不同種類纖毛蟲的**冷卻速度不同，J.prosto—ma，D.rurninantium，E.caudaturn，E.cauda—turn caudatum，P.multivesiculatum和E.maggii的**冷卻速度分別是1.5，1.7，1.5，1.2，1.6，2.3℃/min。其它條件不變，以瘤胃液作為凍融液可顯著提高纖毛蟲凍融存活率。液氮罐

遺憾的是，至今還未見關(guān)于使用其它超低溫保存方法保存原生動(dòng)物的報(bào)道。在超低溫保存研究中，簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)細(xì)胞活性的方法也是非常必要的。

通過顯微鏡觀察菌運(yùn)動(dòng)性確定菌活性是原生動(dòng)物研究中常用的方法，但這種方法存在兩個(gè)不足：一是把不運(yùn)動(dòng)的活細(xì)胞誤認(rèn)為是死細(xì)胞而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，二是外部環(huán)境影響細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，為觀察帶來不便。雙重?zé)晒馊旧ǖ淖儺愊禂?shù)低，其結(jié)果的準(zhǔn)確性更高，可作為一個(gè)快速測(cè)定原蟲細(xì)胞損傷程度的工具[2捫。